1、 技术背景

早在107年前，德国科学家维尔纳·斯帕尔特霍尔兹（Werner Spalteholz）就发现了一种使器官变得半透明的方法，帮助分析组织器官的解剖特征，但当时缺乏便利的观测方法。100年后，随着光片荧光显微镜(light- sheet fluorescence microscopy，LSFM)的发明，组织透明化技术观测生物样本的新方法快速发展并广泛应用。最初，组织透明化技术是由神经科学家开发用于绘制小鼠中枢和周围神经系统的结构。现在组织透明化技术已经应用于解决多种生物医学研究领域的问题，如发育生物学、免疫学和肿瘤学，扩展了样本类型的范围。

透明化后vs处理前

—小鼠腿骨

处理前vs透明化后

—人源细胞类器官

透明化后vs处理前

—大鼠脑

处理前vs透明化后

—小鼠肝脏小叶

2、技术方法

组织透明化技术是运用多种物理化学方法使器官透明，展现完整样本中的细胞特征并绘制出细胞分布的空间关系和结构特征，对整个样本进行客观评估的实验技术。 组织透明化的实验方法基本可分为4步，即样本处理，样本通透，样本标记与透明化，和样本成像。

1、在组织透明化之前，临床样本、模式生物样本和体外培养的类器官样本都可以通过固定或水凝胶包埋的方法保存。

2、 使用去垢剂、乙醇或电泳等方法增加组织通透性，帮助抗体和染料渗透到更深的组织层中。

3、 荧光标记后，将样本浸泡在折射率匹配的试剂中，即可实现组织透明化。

4、样本体积以及所需的分辨率和放大倍数决定了哪种成像技术最适合特定样本在组织透明化后的可视化。透明组织最常用的成像仪器有荧光体视显微镜、共聚焦显微镜和光片显微镜。

使用共聚焦荧光显微镜、双光子荧光显微镜或光片荧光显微镜，我们就能对透明化后的样本进行3D立体荧光成像和定量分析。